检测单位: 河南省农科院畜牧所
检测样品: 伊莱特（活性微矿）
检验类别: 药敏检测
报告日期: 2017年8月4日
1.实验日期：2017年7月1日-2017年7月31日
2.送检单位：韩国龙宫伊莱特株式会社
3.实验目的:检测伊莱特（活性微矿）对猪大肠杆菌（Escherichia coli，E.coli）、猪链球菌（Streptococcus suis,SS）、猪沙门氏菌（Paratyphoid of pigs,SC）和猪副猪嗜血杆菌（Haemophilus parasuis，HPS）的影响，以及对比其他药物其效果如何。
4.实验地点：河南省农科院畜牧所
6.1 实验材料
伊莱特（活性微矿）由韩国龙宫伊莱特株式会社提供；大肠杆菌、链球菌、沙门氏菌及副猪嗜血杆菌由河南省农科院畜牧所提供；烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（NAD） 由广州鼎国生物有限公司提供；乳牛血清购自北京四季青生物试剂有限公司；麦康凯培养基、胰蛋白胨大豆琼脂（TSA）和胰蛋白胨大豆肉汤（TSB）培养基均购自北京陆桥技术有限公司；DNA 提取试剂盒等购自大连宝生物公司；SS培养基和药敏纸片购自杭州滨和微生物试剂有限公司。
6. 2 伊莱特（活性微矿）药敏片的制备
6. 2.1药敏片的制备：取定性滤纸，用打孔机打成6毫米直径的圆形小纸片，取圆纸片50片放入清洁干燥的青霉素空瓶中，瓶口以单层牛皮纸包扎，经15磅15-20分钟高压消毒后，放在37℃温箱或烘箱中数天，使完全干燥。
6. 2.2药液的制备（用于商品药的试验）：按伊莱特（活性微矿）改善量0.2-0.3%配制药液。及1000ml水2-3g药，配制药敏片所用的药液，使每个药敏片含量达到50ug/片。
6. 2.3抗菌药纸片制作：在上述含有50片纸片的青霉素瓶内加入药液适量，并翻动纸片，使各纸片充分浸透药液，翻动纸片时不能将纸片捣烂。同时在瓶口上记录药物名称，放37℃温箱内过夜，干燥后即密封，切勿受潮，置阴暗干燥处存放，有效期3-6个月。
6.3 病原菌的复苏培养
6.4药敏试验
6.4.1划线接种
6.4.2贴药敏片
将镊子于酒精灯火焰灭菌后略停，取药敏片贴到平皿培养基表面。为了使药敏片与培养基紧密相贴，可用镊子轻按几下药敏片。为了使能准确的观察结果，要求药敏片能有规律的分布于平皿培养基上，一般可在平皿中央贴一片，外周可等距离贴若干片（外周一般可贴4-5片），每种药敏片的名称要记住。
6.4.3培养观察
7.观测指标
7.1 药敏实验的结果，在涂有细菌的琼脂平板上，抗菌药物在琼脂内向四周扩散，其浓度呈梯度递减，因此在纸片周围一定距离内的细菌生长受到抑制。过夜培养后形成一个抑菌圈，抑菌圈越大，说明该菌对此药敏感性越大，反之越小，若无抑菌圈，则说明该菌对此药具有耐药性。其直径大小与药物浓度、划线细菌浓度有直接关系。
7.2 药物敏感实验判定标准参考表1，抑菌圈直径在15mm以上为高敏，10mm以下为低敏，无抑菌圈为不敏。
表1 药物敏感实验判定标准
8 实验结果
9. 影响药敏结果的因素
9.1培养基：应根据试验菌的营养需要进行配制。倾注平板时，厚度适合（约5-6mm），不可太薄，一般90mm直径的培养皿，倾注培养基18-20ml为宜。
9.2细菌接种量：细菌接种量应恒定，如果太多，抑菌圈变小。
9.3药物浓度：药物的浓度和总量直接影响抑菌试验的结果，需精确配制。
9.4培养时间：一般培养温度和时间为37℃、12-24小时。但有些细菌生长缓慢，如副猪嗜血杆菌，要培养36-48h才能生长良好，因此要推迟观察时间，而得到准确的抑菌圈。
10. 结论
在本实验中可以看到伊莱特（活性微矿）对大肠杆菌（19mm）、沙门氏菌（22mm）以及副猪嗜血杆菌（23mm）都有显著的抑菌效果，达到了高敏药物的效果，而对链球菌（4mm）效果不明显。为何会有这样的反差呢？分析发现伊莱特（活性微矿）在抑菌效果上的显著表现，主要针对G－菌，而对G＋表现为不敏。
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